上海沪峰生物科技有限公司作者
对于需要活性蛋白的研究人员而言,昆虫细胞不失为一个比较好的选择。多年来,人们主要采用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中生产重组蛋白。然而,制备重组杆状病毒也是一个相当麻烦且耗时的过程。就算实验很顺利,也要前前后后忙碌一个月,才能看到结果。实验不顺利的时候就更别提了,还得郁闷几个月。
为了加速昆虫细胞的表达过程,表达专家推出了BacMagic™系统,一种改进型的杆状病毒方法。通过这种简化的方法,无需噬斑筛选,7-10天获得重组病毒颗粒。
BacMagic DNA是一种改造的苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)基因组,其中关键的病毒基因ORF 1629的一部分已删除,且用细菌人工染色体(BAC)代替了多角体编码区。ORF 1629的删除是为了防止非重组病毒在昆虫细胞中复制,而BAC允许亲本病毒DNA在细菌中以环状DNA增殖。
目的基因和启动子由转移载体携带。利用Insect GeneJuice转染试剂将转移载体、BacMagic DNA共转染进入昆虫细胞。在同源重组之后,ORF1629的功能重建,且目的基因取代了BAC序列。只有重组杆状病毒才能在昆虫细胞中复制,亲本病毒无法复制,因此也就不需要噬斑纯化,节省了至少10天。
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