人类胚胎干细胞的建系比小鼠胚胎干细胞的不同

人类胚胎干细胞的建系比小鼠胚胎干细胞的建系有明显的不同，小鼠胚胎干细胞的建系可以直接将囊胚放在饲养层细胞上，胚性细胞就可以直接长出来，但是人类胚胎干细胞必须人工除去滋养层细胞和透明带。去滋养层细胞主要有两种方法，一是机械法，二是免疫法。免疫法较为简便，机械法效果较好但对实验者技术要求较高。开始培养时尽量不要移动，长到一定程度后分块传代。一般采用鼠源细胞作为饲养层细胞，人类胚胎干细胞对鼠的品系要求较高，针对不同的胚胎干细胞的特性选择不同品系鼠的细胞。饲养层细胞的制备一般采用胶原酶和机械法结合使用的方法，但是使用纯机械的方法。在培养过程中可能会出现一些分化的细胞，这是正常现象，除去这些分化细胞即可。建系成功的主要标准是核型无异常、可以冻存和复苏、可以自我更新、有分化能力。好的胚胎干细胞系均质、核仁较大。

在培养人类胚胎干细胞的过程中，一般都采用鼠源的饲养层细胞，但是鼠源的饲养层细胞对人胚胎干细胞培养后的应用有不良影响。所以人们在思考是不是可以限制饲养层细胞的分裂、不用饲养层细胞或是采用人源的饲养层细胞。但是后两种方法都存在很大的困难，不用饲养层细胞的办法现在只有很少的实验室做出来过，难以重复，细胞容易发生突变；采用人源饲养层细胞的方法可以完成培养，但是难以建系。

分化是研究胚胎干细胞重要技术，主要用体内和体外两种方式。体内分化一般是植入裸鼠皮下形成畸胎瘤。而体外分化则主要是采用形成拟胚体、共培养、无血清培养等方式。一般采用传代次数较少（10代以内）的细胞来进行分化实验，因为传代次数过多细胞易发生突变，影响分化能力。金颖教授特别提到分化实验一个很重要的因素就是细胞不能受到支原体感染，如果有支原体感染则分化实验难以进行，大多数时候需要更换别的没有支原体污染的细胞进行实验。