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己糖激酶法的实验原理

2011年10月20日 14:34:06人气:1430来源:上海沪峰生物科技有限公司

       己糖激酶是六碳糖的磷酸化酶,催化使葡萄糖从稳定状态变为活跃状态,活化一个葡萄糖需要消耗1个ATP,一个ATP放出一个高能磷酸键,大约放出30.5kj自由能,大部分变为热量而散失,小部分使磷酸与葡萄糖结合生成葡萄糖-6-磷酸。

实验原理
  在己糖激酶催化下,葡萄糖和ATP发生磷酸化反应,生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)与ADP。前者在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)催化下脱氢,生成6-磷酸葡萄糖酸(6-GP),同时使NADP还原成NADPH。反应式如下:   
根据反应方程式,NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比,在波长340nm监测吸光度升高速率,计算血清中葡萄糖浓度。

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