小麦粉破损淀粉测定法α-*法

　　1主题内容与适用范围

　　本标准规定了用α-*测定小麦粉破损淀粉值的原理使用的试剂、仪器、分析

　　的步骤以及结果计算。

　　本标准适用于小麦粉破损淀粉值的测定。

　　2方法原理

　　小麦粉中破损淀粉对α-*的敏感性大大高于未破损淀粉，在常温下能被α-

　　*降解生成糊精和一定量的还原糖。利用此特性，在规定的条件下，用α-*

　　降解小麦粉中破损淀粉，再用铁氰化钾法测定其还原糖量，并根据法兰德的经验公式计

　　算小麦粉中的破损淀粉值。

　　3试剂

　　以下试剂未经标明的均为分析纯试剂，水为蒸馏水。

　　3.1缓冲溶液

　　溶解4.1g无水乙酸钠于水中，加入3mL冰乙酸，再用水稀释至1000mL，pH值应

　　为4.7±0.1。

　　3.2提取溶液

　　将20g氯化钠及0.2g乙酸钙溶于水中，再稀释至1000mL。

　　3.3α-*液

　　称取活性相当于15000±1500A的α-*制剂溶于500mL提取液中，再加入

　　500mL缓冲液，α-*活性测定见附录A（补充件）a-*活性测定。此溶液用

　　时现配。

　　3.410%（V/V）硫酸溶液。

　　3.512%钨酸钠溶液。

　　3.60.1M碱性铁氰化钾溶液

　　称取32.9g干燥纯净的铁氰化钾与44.0g*溶于1000mL水中，贮于棕色

　　瓶避光保存。

　　3.7乙酸盐溶液

　　70g氯化钾和40g硫酸锌溶于水中，加入200mL冰乙酸，再用水稀释至1000mL。

　　3.810%*溶液。

　　3.91%淀粉溶液。

　　3.100.1M*溶液

　　称取24.82g*（含5个结晶水）和3.8g四硼酸钠溶于1000mL水中，贮

　　于棕色瓶避光保存，一星期后按GB5490《粮食、油料和植物油脂检验一般规则》附录

　　B规定方法标定其浓度。

　　3.11酸洗石英砂。

　　4仪器和用具

　　4.1玻璃试管：φ25×220mm。

　　4.2量筒：50mL；25mL。

　　4.3恒温水浴：可控温30±0.1。

　　4.4秒表。

　　4.5加液器或移液管：2mL；10mL。

　　4.6移液管：5mL。

　　4.7玻璃漏斗及中速滤纸。

　　4.8电炉。

　　4.9锥形瓶：100mL。

　　4.10滴定管：10mL。

　　4.11天平：感量0.01g；0.1mg。

　　4.12pH计或精密pH试纸：可测pH4.7±0.1。

　　5分析步骤

　　5.1称样量

　　一般小麦粉均假定其水分含量为14.0%，淀粉含量为68%-72%，称样量为1.00

　　0.01g。如果淀粉含量过高或过低时，则称样量应按式（1）计算：

　　70

　　称样量（g）=-----------

　　（95-p-M）

　　式中：P——100g试样中蛋白质的克数（含氮量×5.7）；

　　M——100g试样中水分的克数。

　　5.2酶解

　　称取5.1规定量的试样于玻璃试管中，加入1小勺酸洗石英砂，混匀并将试样摇松

　　倾斜于试管底部，准确量取46mL已预热至30℃的α-*液，先将少许α-*液

　　加入试样中并尽量摇匀，立即计时，再加入其余α-*液，加盖试管并上下颠倒摇

　　动约30次使试样均匀悬浮。迅速将试管浸入30℃水浴中，然后每隔10min取出试管，

　　上下颠倒摇动10次使试样重新均匀悬浮，恒温酶解刚好60min时，取出试管，立即加

　　入2mL10%硫酸溶液，充分混匀后，再加入2mL12%钨酸钠溶液，摇匀并放置约2min

　　后，用中速滤纸过滤。充去zui初几滴，收集滤液于干净锥形瓶中，此滤液即为试样测定

　　液。

　　另取一支试管不加小麦粉试样，同时同上操作，所得滤液即为空白对照液。

　　5.3测定还原糖

　　准确吸取5mL试样液于试管中，再准确加入10mL0.1M碱性铁氰化钾溶液，混合

　　后将试管浸入剧烈沸腾的水中（可将试管置于铁丝笼架放入铝锅煮沸的水中，每次可同

　　时作多个样品的测定），继续加热待水再沸腾后开始计时，准确反应20min后，取出试

　　管立即置流水冷却。冷却后将试管中溶液倒入锥形瓶中，并用25mL乙酸盐溶液分三次

　　洗涤试管一并倒入锥形瓶内，再加入10ml10%*溶液。然后用0.1M*

　　溶液滴定至淡黄色，再加入约1mL1%淀粉液，继续滴定至溶液蓝色消失（半分钟内溶

　　液不返蓝色），记录用去*溶液的体积为V1（mL）。

　　吸取空白对照液5mL代替试样液，同上操作，记录用去*溶液的体积为

　　V2（mL）。

　　6结果计算

　　6.1氧化5mL样品液（相当于0.1g小麦粉样品）中还原糖所需0.1M铁氰化钾体积V

　　按式（2）计算；

　　c

　　V=（V2-V1）×---………………………………（2）

　　0.1

　　式中：V——氧化试样液中还原糖所需的0.1M铁氰化钾液的体积，mL；

　　V1——滴定试样液用去*的体积，mL；

　　V2——滴定空白液用去*的体积，mL；

　　c——*的摩尔浓度，M；

　　0.1——换算成0.1M铁氰化钾溶液体积的系数。

　　6.2小麦粉麦芽糖值的确定

　　根据式（2）计算所得V值在表1中用插入法查出相应的100g小麦粉中含有麦芽糖

　　的克数，即为该样品的麦芽糖值L。

　　6.3小麦粉破损淀粉值（P）按式（3）计算：

　　P=（5×L-3.5）×6………………………………（3）

　　式中：L——小麦粉麦芽糖值。

　　7结果允许差

　　两次测定结果之差不得超过平均值的5%，测定结果保留小数点后一位。

　　附录A

　　α-*活性的测定

　　（补充件）

　　A1主题内容和适用范围

　　本补充件规定了用比色法测定α-*活性的方法。

　　本补充件适用于各种来源的α-*制剂及谷类产品的α-*活性的测定。

　　A2方法原理

　　α-*能降解--限制糊精，经过不同的反应时间后，反应混合物与碘的显色

　　强度随时间增加而降低，用测定这种显色强度随时间降低的速度来反映α-*的活

　　性。

　　A3试剂

　　以下试剂未经标明的均为分析纯，水为蒸馏水。

　　A3.10.2%氯化钙溶液。

　　A3.2碘贮备液

　　溶解11.0g*于少量水中，加入5.5g结晶碘，搅拌至碘*溶解，再稀释至

　　250mL，置棕色瓶中贮于暗处。此液可保存一个月。

　　A3.3碘稀释液

　　溶解40.0g*于水中，加入4.0mL碘贮备液，用水稀释至1000mL，用时现配。

　　A3.4缓冲溶液

　　溶解164g无水乙酸钠或272g三水乙酸钠（CH3COONa·3H2O）于水中，加入120mL

　　冰乙酸，用水稀释至1000mL。

　　A3.5可溶性淀粉。

　　A3.6β-*液

　　取10g具有酶活性的新鲜黄豆粉（粗细度为通过15mm孔筛的筛下物）于烧杯中，

　　加入85mL水和15mL0.05M硫酸溶液，充分搅匀，静置15min后，用中速滤纸过滤，该

　　滤液用于制备β--限制糊精。

　　A3.70.05M硫酸溶液。

　　A3.8β--限制糊精

　　称取5.00g（以干态计）可溶性淀粉于小烧杯中，加入约20mL水，搅拌使成悬浮

　　液，然后将悬浮液边搅拌边缓慢倒入盛有约100mL沸腾水的高型烧杯中，并用洗瓶将

　　小烧杯中淀粉全部转移至高型烧杯，继续搅拌并加热使缓慢沸腾2min，然后用表面皿

　　盖上烧杯口，取出用流水冷却，再加入25mL缓冲溶液及50mLα-*液，在室温下，

　　放置24h后，加入一匙浮石粉，在10min内缓慢加热至沸，保持沸腾5min后，取出流水

　　冷却，zui后用水定容至250mL，摇匀、过滤，滤液中加几滴甲苯，在25℃以下贮存5

　　天，此溶液的pH须在4.7±0.1。

　　A4仪器和用具

　　A4.1玻璃试管。

　　A4.2高型烧杯：250mL。

　　A4.3容量瓶：250mL；100mL。

　　A4.4玻璃漏斗：φ6cm。

　　A4.5表面皿：φ7cm。

　　A4.6移液管：2mL；5mL；15mL。

　　A4.7量筒：25mL；50mL。

　　A4.8加液器或移液管：10mL。

　　A4.9电炉：1000W。

　　A4.10恒温水浴：可控温30±0.1℃及20±0.5℃。

　　A4.11秒表。

　　A4.12实验磨粉机。

　　A4.13筛子：孔径为1.0mm及0.8mm。

　　A4.14pH计或精密pH试纸：可测pH4.7±0.1

　　A4.15分光光度计。

　　A5分析步骤

　　A5.1α-*溶液的配制

　　A5.1.1酶制剂α-*液的配制

　　称取α-*制剂48mg，用0.2%氯化钙溶液溶解并稀释至100mL。根据该溶

　　液酶活性的大小再用0.2%氯化钙稀释至适合于测定活性的溶液，稀释后的溶液应使

　　35%-60%的限制糊精在15-40min内被降解，即zui后测得的吸光度值应为底物校准时

　　吸光度值的40%-65%。

　　A5.1.2麦芽粉及其他产品α-*液的配制

　　测定麦芽粉可称样100g，如测定其他产品，则根据酶活性的大小拟定称样量，均

　　按下述步骤提取酶液。

　　将预先在30℃水浴中恒温10min以上的0.2%氯化钙溶液100±0.5mL加入试样中，

　　加塞振摇使充分混合，立即置于30℃水浴中，每隔15min取出试管，上下颠倒混合10

　　次，再浸入水浴（振摇次数与程度对结果有影响），恒温提取60min后取出过滤（不要

　　振摇），此滤液即为酶提取液。

　　A5.2底物的校准

　　A5.2.1混合5mLβ—限制糊精及15mL0.2%氯化钙溶液于烧杯中。

　　A5.2.2在试管中先加入10mL稀释碘液，再加入A5.2.1的混合液2mL，然后用适量的

　　水稀释（一般稀释水量为20-40mL之间），混合后在20℃下用1cm比色杯在波长575nm

　　下测其吸光度。

　　A5.2.3调整原稀释水量再按A5.2.2操作，反复多次直至测得的吸光度值在0.55-0.6

　　之间，记录此时稀释水量V（mL），即为该底物的校正水量。

　　A5.2.4在另一支已加入10mL稀释碘液的试管中，加入2mL0.2%氯化钙液代替混合

　　液，同A5.2.2操作，作为A5.2.2测定吸光度时的空白对照。

　　A5.3α-*活性测定

　　A5.3.1将待用--限制糊精预热至30℃。

　　A5.3.2吸取A51稀释后的酶液15mL于试管中，置30水浴恒温5!10min。

　　A5.3.3用速流移液管吸取5mL已预热的--限制糊精迅速加入含15mL酶液的试管中，

　　在加入糊精的同时立即用秒表计时，然后分别在30恒温10min和30min时吸取此混合

　　液，按下述操作。

　　A5.3.4吸取2mL上述混合液立即加入预先加入10mL稀释碘液的试管中，再加入

　　A5.2.3测得的水的体积V（mL）（即校正水量），混匀后在20下恒温，并用1cm比色

　　杯在波长575nm下测定吸光度（如测定一系列样品，可在所有样品均完成显色后再一起

　　测定吸光度，但zui长间隔时间不得超过1h）。

　　A5.3.5用2mL0.2%氯化钙溶液代替混合液，同A5.3.4操作，作为A5.3.4测定吸光

　　度时的空白对照。

　　A5.3.5用2mL0.2%氯化钙溶液代替混合液，同A5.3.4操作，作为A5.3.4测定吸光

　　度时的空白对照。