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HRP催化过氧化物的氧化反应,代表性的过氧化物为H2O2,其反应式如下:DH2+H2O2D+H2O
大鼠elisa试剂盒上式中,DH2为供氧体,H2O2为受氢体。在ELISA中,DH2一般为无色化合物,经酶作用后成为有色的产物,以便作比色测定。常用的供氢体有邻苯二胺(OPD)、四甲基联*(TMB)和ABTS
OPD氧化后的产物呈橙红色,用酸终止酶反应后,在492nm处有zui高吸收峰,灵敏度高,比色方便,是HRP结合物zui常用的底物。OPD本身难溶于水,OPD·2HCL为水溶性。曾有报道OPD有致异变性,操作时应予注意。OPD见光易变质,与*混合成底物应用液后更不稳定,须现配置现用。在试剂盒中,OPD和H2O2一般分成二组分,OPD可制成一定量的粉剂或片剂形式,片剂中含有发泡助溶剂,使用更为方便。*则配入底物缓冲液中,有制成易保存的浓缩液,使用时用蒸馏水稀释。*的ELISA试剂盒中则直接配成含保护剂的工作浓度为0.02%H2O2的应用液,只需加入OPD后即可作为底物应用液。
TMB经HRP作用后共产物显蓝色,目视对比鲜明。TMB性质较稳定,可配成溶液试剂,只需与H2O2溶液混和即成应用液,可直接作底物使用。另外,TMB又有无致癌性等优点,因此在ELISA中应用日趋广泛。酶反应用HCL或H2SO4终止后,TMB产物由蓝色呈黄色,可在比色计中定量,zui适吸收波长为405nm。
ABTS虽不如OPD和TMB敏感,但空白值极低,也为一些试剂盒所采用。
大鼠elisa试剂盒另一种HRP的底物为3-(4-羟基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenlypropionicacid,HPPA],经HRP作用后,产物显荧光,可用荧光光度计测量。用于ELISA的优点为可加宽定量测定的线性范围。
HRP对氢受体的专一性很高,仅作用于H2O2、小分醇的过氧化物和尿素过氧化(ureaperoxide)。H2O2应用zui多,但尿素过氧化物为固体,作为试剂较H2O2方便、稳定。试剂盒供应尿素过氧化物片剂,用蒸馏水溶解后,在底物缓冲液中密闭、低温(2~8℃)可稳定1年。
2-碘-5-甲基苯甲酸 CAS号: 52548-14-8
4-哒嗪甲醇 CAS号: 50901-43-4
4-叔丁基环己基甲酸 CAS号: 5451-55-8
4-氨基-2-哌啶酮 CAS号: 5513-66-6
1-甲基哌啶-3-酮 CAS号: 5519-50-6
4-苄氧基溴苄 CAS号: 5544-60-5
1,5-二甲基-1H-吡唑-3-甲酸 CAS号: 5744-59-2
5-氰基吡啶-2-羧酸、5-氰基-2-吡啶甲酸 CAS号: 53234-55-2
4-乙醇基吡啶 CAS号: 5344-27-4
5-异丙基-1H-吡唑-3-胺 CAS号: 56367-24-9
4-氯-3-硝基苯乙酮 CAS号: 5465-65-6
5-氯吲哚-2-羧酸乙酯 CAS号: 4792-67-0
5-甲基吡嗪-2-羧酸甲酯 CAS号: 41110-33-2
5-嘧啶甲酸乙酯 CAS号: 40929-50-8
3,5-*甲腈 CAS号: 4110-35-4
2'-氨基-4',5'-二甲氧基苯乙酮 CAS号: 4101-30-8
吡唑-3,5-二羧酸二甲酯 CAS号: 4077-76-3
吡唑-3,5-二羧酸二甲酯 CAS号: 4077-76-3
4-氯嘧啶-5-甲酸乙酯 CAS号: 41103-17-7
邻苯二甲酸单甲酯 CAS号: 4376-18-5
大鼠elisa试剂盒
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