elisa试剂盒分析双缩脲法鉴定蛋白质的方法

大鼠elisa试剂盒双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时(多肽)，试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。
试剂与器材
(1)标准蛋白质溶液:用标准的结晶牛血清清蛋白(BSA)或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0.05N NaOH配制。
(2)双缩脲试剂:称以1.50克硫酸铜(CuSO4·5H2O)和6.0克酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O)，用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中(或内壁涂以石蜡的瓶中)。此试剂可*保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。
实验原理
双缩脲是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与二价铜离子形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能够以一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。干扰这一测定的物质主要有:硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。
大鼠elisa试剂盒双缩脲法的优点是较快速 ，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差，不适合微量蛋白的测定。

4-氨基-2-哌啶酮    CAS号：    5513-66-6    进口、组装
1-甲基哌啶-3-酮    CAS号：    5519-50-6    进口、组装
4-苄氧基溴苄    CAS号：    5544-60-5    进口、组装
1,5-二甲基-1H-吡唑-3-甲酸    CAS号：    5744-59-2    进口、组装
5-氰基吡啶-2-羧酸、5-氰基-2-吡啶甲酸    CAS号：    53234-55-2    进口、组装
4-乙醇基吡啶    CAS号：    5344-27-4    进口、组装
5-异丙基-1H-吡唑-3-胺    CAS号：    56367-24-9    进口、组装
4-氯-3-硝基苯乙酮    CAS号：    5465-65-6    进口、组装
5-氯吲哚-2-羧酸乙酯    CAS号：    4792-67-0    进口、组装
5-甲基吡嗪-2-羧酸甲酯    CAS号：    41110-33-2    进口、组装
5-嘧啶甲酸乙酯    CAS号：    40929-50-8    进口、组装
3,5-*甲腈    CAS号：    4110-35-4    进口、组装
2'-氨基-4',5'-二甲氧基苯乙酮    CAS号：    4101-30-8    进口、组装
吡唑-3,5-二羧酸二甲酯    CAS号：    4077-76-3    进口、组装
吡唑-3,5-二羧酸二甲酯    CAS号：    4077-76-3    进口、组装
大鼠elisa试剂盒