斑点免疫渗滤技术ICS金标法快速测试试剂盒使用评估分析

斑点免疫渗滤技术（Dot immunofiltration assay，DIFA）是以微孔膜为载体，利用其过滤功能，使所有反应液均自微孔膜上滤过，迅速完成免疫反应及检测。根据标记物不同分为斑点免疫酶渗滤法（dot immunoenzyme filtration assay，DIEFA）和斑点金免疫渗滤法（Dot immunogoldfiltration assay，DIGFA）。由于胶体金制备简单稳定，无需着色，且能与多种蛋白结合，因而DIGFA技术发展迅速。该试剂选用纯化HCV多种基因工程抗原的混合物作为包被抗原，采用间接二抗法测定原理，结合金标技术检测，具有较高的*性。

1 材料与方法

1.1 材料 ICS金标法丙肝快速测试剂盒（IND集团），丙肝病毒酶联免疫测试试剂盒（华美公司），RIBA HCV3.0SIA试剂（CHIKON公司）。卫生部抗-HCV血清盘。FAME和BEPⅢ全自动酶免分析仪。CHIRON全自动RIBA确认分析仪。无偿血肝素抗凝血样。

1.2 评价步骤和方法

1.2.1 血清盘取样 用卫生部抗-HCV血清盘中阳性样随机抽取15份作为阳性样，用经华美和ORTHO ELISA试剂盒筛选后阴性样随机抽取作为阴性标本，组成一个客观评价体系进行评估。

1.2.2 应用评估取样 取用经华美和ORTHO ELISA试剂盒筛选后无偿献血阳性血样作为阳性标本，阴性样随机抽取作为阴性标本，组成应用评价体系。

1.2.3 检出限实验 用临界血清（2ng/L）取样15μl、30μl、45μl进行检测，相当浓度为1ng/L，2ng/L，3ng/L。

1.2.4 干扰实验 （1）血清盘含有相关病种样本和已知具有干扰物质样本;（2）随机抽取无偿献血样本中ALT不正常、梅毒阳性、乙肝阳性等样本进行实验;（3）抗凝血的影响。

1.2.5 结果测定 按试剂盒的操作方法进行测定和判读，对结果不同的样本进行复查。ORTHO和华美ELISA试剂检测结果以FAME和BEPⅢ全自动酶免疫分析仪检测结果为准。

2 评价结果

2.1 检出限结果 当临界血清浓度为1ng/L不能检出;2ng/L检测结果为可疑阳性;3ng/L检测结果为弱阳性。由此可推测该试剂盒检出限为2～3ng/L，同报道结果一致。

2.2 干扰实验结果 血清盘实验除一极弱阳性样本未检出外，未发现其他非特异反应。无偿献血阴性样本未发现 假阳性反应。抗凝血对检测无干扰，但降低检测的灵敏度和延长检测时间（全过程需约10min）。弱阳性样本使用抗凝血未检出而血清可以检出共2份，占总数18%。表明使用抗凝血检测会导致弱阳性漏检。

3 讨论

该试剂盒操作简单迅速，无需特殊仪器，裸眼可观结果。检测过程设内对照，能有效保证检测质量。该试剂同ELISA国产和进口试剂盒相比均具有较高的灵敏度、特异性和符合率，可以在临床上推广应用。该试剂对环境无特殊要求，故尤适合实验室外的野地、现场和家庭等进行检 测。由于使用抗凝血会导致检测灵敏度下降和检测时间延长等，应尽可能使用血清，同时考虑适当增加样本血清用量，提高检出率。

本评价过程使用了卫生部临检中心血清盘，具有较高的客观性。共计从3023人份的无偿献血的样本中进行抽样，具有一定的现实意义。由于该试剂盒方法干扰因素较多，在临床上可以进一步做抗干扰实验如RF、补体、体内的酶、抗凝剂和抑制剂等。