elisa检测试剂盒测定步骤

elisa检测试剂盒操作步骤
一、试剂准备
1. 使用前将所有试剂平衡至室温。
2. 洗液(Wash Buffer)：如果浓缩液中已经形成结晶，平衡至室温，并轻轻地摇晃直到结晶*溶解。加入去离子水或蒸馏水稀释20ml浓缩洗涤液至500ml。
3. 底物溶液(Substrate Solution)：显色试剂A和B应该在使用前15min以等体积混合。避光保存。每孔需要200ul生成的混合物。
4. IL-6标准品(IL-6 Standard)：使用5ml标准稀释液RD5T(Calibrator Diluent RD5T)(适用于细胞培养上清液样本)或标准稀释液RD6F(Calibrator Diluent RD6F)(适用于血清/血浆样本)重新配制IL-6标准品。重新配制的产品为300pg/ml贮存液。稀释前允许将标准品至少轻轻搅拌15min。
5. 吸取适当的标准稀释液667ul到100pg/ml EP管，500ul稀释液到其它 EP管中。适用贮存液配制一系列的稀释液(如下)。进行下一次转移前充分地混匀各个EP管。没有稀释的标准品作为高标准。适当的标准稀释液作为0标准(0pg/ml)。
注意：Calibrator Diluent RD6F 包含*(可能与铅和铜的管道)形成爆炸的金属叠氮化合物。处理期间用大量的水冲洗。该盒的终止液为酸溶液。使用时戴眼睛、手、脸和衣服的防护。
二、测定步骤
使用前将所有IL-6ELISA试剂盒和样本平衡至室温。*所有的样本、标准和对照测定双份。
1. 准备所有的试剂和工作标准品。
2. 取下多余的微量培养板条，放回装有干燥剂的锡箔袋中，重新密封。
3. 每孔加入100ul Assay Diluent RD1W。
4. 每孔依次加入100ul 标准品、样本和对照。用橡皮条密封。室温孵化2小时。记录测定标准和样本的分布。
5. 吸弃孔内液体，每孔400ul洗涤液，充分洗涤后*去除液体。在干净的纸上拍干。反复洗涤4次。
6. 每孔加入200ul IL-6 Conjugate。用新的橡皮膏条密封。室温温浴2小时。
7. 重复步骤5。
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