elisa检测试剂盒说明书测定步骤

elisa检测试剂盒测定步骤
使用前将所有IL-6ELISA试剂盒和样本平衡至室温。*所有的样本、标准和对照测定双份。
1. 准备所有的试剂和工作标准品。
2. 取下多余的微量培养板条，放回装有干燥剂的锡箔袋中，重新密封。
3. 每孔加入100ul Assay Diluent RD1W。
4. 每孔依次加入100ul 标准品、样本和对照。用橡皮条密封。室温孵化2小时。记录测定标准和样本的分布。
5. 吸弃孔内液体，每孔400ul洗涤液，充分洗涤后*去除液体。在干净的纸上拍干。反复洗涤4次。
6. 每孔加入200ul IL-6 Conjugate。用新的橡皮膏条密封。室温温浴2小时。
7. 重复步骤5。
应用双抗体夹心法测定标本中白介素6(IL-6)水平。用纯化的白介素6(IL-6)抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入白介素6(IL-6)，再与HRP标记的白介素6(IL-6)抗原结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中白介素6(IL-6)浓度。
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