elisa检测试剂盒实验操作要点

elisa检测试剂盒实验操作要点
1标本的采取和保存 
可用作elisa测定的标本十分广泛，体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液)，有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固收缩后即可取得。除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。 血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。
2 试剂的准备
按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
3 加样 
elisa检测试剂盒在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。 加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定(如间接法ELISA)需用稀释的血清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。
4 保温 
在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)，有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当。 ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有zui贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。
温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应动力学研究时，elisa检测试剂盒实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为*，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过夜，以形成zui多的沉淀。但因所需时间太长，在ELISA中一般不予采用。
elisa检测试剂盒心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)ELISA试剂盒    ，英文名：    cTnT ELISA Kit
心肌锚蛋白重复域1(ANKRD1)ELISA试剂盒    ，英文名：    ANKRD1 ELISA Kit
心肌肌凝蛋白轻链1(CMLC-1)ELISA试剂盒    ，英文名：    CMLC-1 ELISA Kit
心肌肌钙蛋白T(cTn-T)ELISA试剂盒    ，英文名：    cTn-T ELISA Kit
心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA试剂盒    ，英文名：    cTn-Ⅰ ELISA Kit
协同刺激分子受体(CMR)ELISA试剂盒    ，英文名：    CMR ELISA Kit
小表皮粘蛋白(SBEM)ELISA试剂盒    ，英文名：    SBEM ELISA Kit
小而密低密度脂蛋白(sLDL)ELISA试剂盒    ，英文名：    sLDL ELISA Kit
小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)ELISA试剂盒    ，英文名：    AFP-L3 ELISA Kit
小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)ELISA试剂盒    ，英文名：    AFP-L2 ELISA Kit
小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)ELISA试剂盒    ，英文名：    AFP-L1 ELISA Kit
相扑结合酶UBC9(UBE2I/UBC9/UBCE9)ELISA试剂盒    ，英文名：    UBE2I/UBC9/UBCE9 ELISA Kit
腺相关病毒(AAV)ELISA试剂盒    ，英文名：    AAV ELISA Kit
腺苷脱氨酶(ADA)ELISA试剂盒    ，英文名：    ADA ELISA Kit
腺苷酸环化酶1(AC-1)ELISA试剂盒    ，英文名：    AC-1 ELISA Kit
腺苷三磷酸结合盒转运体G2(ABCG2)ELISA试剂盒    ，英文名：    ABCG2 ELISA Kit
腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)ELISA试剂盒    ，英文名：    ABCA1 ELISA Kit
腺苷三磷酸结合盒转运蛋白G2(ABCG2)ELISA试剂盒    ，英文名：    ABCG2 ELISA Kit
线粒体肽蛋氨酸亚砜还原酶(MSRA)ELISA试剂盒    ，英文名：    MSRA ELISA Kit
衔接蛋白酶活化因子1(APAF1)ELISA试剂盒    ，英文名：    APAF1 ELISA Kit
酰基化饥饿素(AG)ELISA试剂盒    ，英文名：    AG ELISA Kit
酰化刺激蛋白(ASP)ELISA试剂盒    ，英文名：    ASP ELISA Kit
纤维母细胞生长因子受体1癌基因伴侣(FGFR1OP)ELISA试剂盒    ，英文名：    FGFR1OP ELISA Kit
纤维母细胞表面抗原(FSP)ELISA试剂盒    ，英文名：    FSP ELISA Kit
纤维连接素相关抗原(FRA)ELISA试剂盒    ，英文名：    FRA ELISA Kit
纤维连接蛋白(FN)ELISA试剂盒    ，英文名：    FN ELISA Kit
纤维介素蛋白(fgl2)ELISA试剂盒    ，英文名：    fgl2 ELISA Kitelisa检测试剂盒